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基本信息

• 中文名称：酪蛋白激酶 1 底物；精 - 精 - 赖 - 天冬 - 亮 - 组 - 天冬 - 天冬 - 谷 - 谷 - 天冬 - 谷 - 丙 - 甲硫 - 丝 - 异亮 - 苏 - 丙
• 三字母序列：Arg-Arg-Lys-Asp-Leu-His-Asp-Asp-Glu-Glu-Asp-Glu-Ala-Met-Ser-Ile-Thr-Ala
• 单字母序列：RRKDLHDDEEDEAMSITA
• 分子式：C85H139N27O35S
• 分子量：2131.26
• 结构特征：十八肽，线性多肽，无 N 端乙酰化、C 端酰胺化修饰；无 D 型氨基酸，不含半胱氨酸残基，无巯基与二硫键，无荧光、生物素等标记基团。氨基酸依次为 Arg、Arg、Lys、Asp、Leu、His、Asp、Asp、Glu、Glu、Asp、Glu、Ala、Met、Ser、Ile、Thr、Ala。
• 磷酸化位点：第 15 位 Ser，是 CK1（Casein Kinase 1，酪蛋白激酶 1）识别催化的丝氨酸残基，Ser 侧链羟基接受 ATP 的 γ- 磷酸基团。序列中含有 Met（甲硫氨酸），甲硫氨酸的硫原子容易被氧化，这是该肽区别于前面几条激酶底物肽的重要特点。
• 结构式：

基本性质

经典 CK1 体外多肽底物，来源于天然蛋白识别区段。序列同时含有碱性残基 Arg、Lys，还有大量酸性 Asp、Glu 残基，属于两性多肽，水溶性良好，易溶于纯水、中性缓冲盐溶液，难溶于纯有机溶剂。 不含 Cys，但含有 Met，Met 侧链硫醚基团对氧化敏感，在暴露氧气、过氧化氢或者反复冻融条件下，容易氧化生成甲硫氨酸亚砜，氧化产物会降低底物被 CK1 识别的能力。固体粉末有吸湿性；水溶液可被肽酶缓慢水解，高温、碱性环境会加速肽键断裂。理论等电点偏酸性。

作用机理

CK1 家族是保守的丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶，特点是优先识别磷酸化残基或者酸性氨基酸，位于磷酸化位点 N 端上游，这和 CK2（偏好位点下游酸性残基）是很重要的区分点。 RRKDLHDDEEDEAMSITA 中，Ser15 上游富集大量酸性 Asp/Glu 残基，形成 CK1 偏好的识别环境。CK1 催化 ATP 的磷酸基团转移至 15 位 Ser 的羟基上，生成磷酸化多肽。磷酸化之后多肽负电荷进一步增加。可采用 ³²P 同位素掺入、HPLC、毛细管电泳、质谱、磷酸特异性抗体等方法来定量磷酸化产物。

应用领域

科研工具肽，仅限体外生化酶活实验，不可用于人体给药或临床诊断。

1. CK1 体外酶活测定：重组酪蛋白激酶 1（CK1α、CK1δ、CK1ε 亚型）活性定量，是文献广泛使用的标准底物。
2. CK1 抑制剂高通量筛选：用于小分子化合物筛选，通过检测磷酸产物减少，评估化合物对 CK1 的抑制活性，计算 IC50、Ki。
3. 酶动力学参数测定：测定 Km、Vmax、kcat 等动力学常数，研究 CK1 不同亚型的底物识别偏好。
4. 激酶选择性验证：与 CK2、PKA、PKG 等激酶底物平行对照，评估抑制剂对 CK1 的选择性，区分 CK1/CK2 活性。
5. 质谱方法学开发：作为标准底物，建立磷酸化多肽 LC-MS/MS 检测体系。

药物研发

CK1 家族参与 Wnt 通路、昼夜节律调控、细胞凋亡、DNA 损伤应答，CK1δ/ε 是肿瘤、神经退行性疾病、炎症的热门靶点。 该多肽本身不是药物，仅作为生化筛选工具，用于体外高通量筛选 CK1 小分子抑制剂。目前多个 CK1 抑制剂处于临床前研究阶段，部分候选分子进入早期临床评估。多肽极性高，细胞膜穿透差，在体内极易被肽酶水解，不适合直接开发为治疗药物。

研究进展

RRKDLHDDEEDEAMSITA 是经典 CK1 底物，截取自天然蛋白的 CK1 识别区域。构效关系研究证实：Ser 上游连续酸性残基是 CK1 识别的关键；上游酸性残基删减或者突变，会显著降低催化效率。该底物经常用来对比 CK1 各个亚型（CK1α,δ,ε）之间底物偏好差异，也常和 CK2 底物 RRREETEEE 成对使用，用来区分 CK1 和 CK2 激酶活性。由于含有 Met，氧化是该肽实验中常见的坑，很多文献会提示实验体系中添加 DTT 或者抗坏血酸抑制 Met 氧化。

储存规范

粉末：-20℃密封干燥避光保存；推荐除氧封装，减少甲硫氨酸氧化。尽量减少反复开盖，防止吸潮。

溶液：现配现用，中性缓冲液配制；分装成单次使用小份，-20℃冻存，严禁多次冻融。可按需添加低浓度 DTT / 抗坏血酸抑制 Met 氧化；避免室温久放，避开强碱环境。